PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Giglioti R., Guimarães S., Oliveira-Sequeira T.C.G., David E.B., Brito L.G., Huacca M.E.F., Chagas A.C.S. & Oliveira M.C.S. 2016. Proteolytic activity of excretory/secretory products of Cochliomyia hominivorax (Diptera: Calliphoridae). Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):711-718. Embrapa Rondônia, Rodovia BR-364 Km 5,5, Porto Velho, RO 76815-800, Brazil. E-mail: luciana.gatto@embrapa.br The protein profiles and proteolytic activity of the excretory secretory products (E/SP) of the first (L1), second (L2) and third (L3) larval stages of Cochliomyia hominivorax were studied in the laboratory. Analysis on the E/SP protein profile was carried out using polyacrylamide gel containing sodium dodecyl sulfate (SDS-PAGE). The E/SP of each larval stage (L1, L2 and L3) treated with protease inhibitors, containing 30µg, 40µg and 50µg of protein, was applied to the 10% polyacrylamide gel. The proteolytic activity of the crude E/SP was analyzed in gels copolymerized with gelatin and by colorimetric assays using azocasein as a substrate, with the characterization of the proteases using synthetic inhibitors. Different protein profiles were observed for the larval instars, with L1 presenting the most complex profile. Nevertheless, various protein bands were observed that were common to all the larval instars. The E/SP of all the instars showed proteolytic activity on gelatin, evidenced by proteolysis zones, predominantly with apparently higher molecular masses in L1, while for L2 and L3 the proteolysis zones could also be observed in regions with lower masses. Tests with protease inhibitors using gelatin as substrate showed that the E/SP of larvae were mainly composed of serine proteases. Additionally, inhibition was observed in L2 E/SP treated previously with EDTA, an inhibitor of metalloproteases. The assays with azocasein revealed a gradual increase of proteolytic activity on this substrate with larval development progress, with the strongest inhibitions being observed after treatments with 3,4-dichloroisocoumarin (DCI) for E/SP of L1, L2 and L3. These results suggest that C. hominivorax larvae produce different proteases, a fact that can be related to the parasite’s vital processes for survival, such as penetration into the host’s tissues and nutrition during the larval stage.

• Cochliomyia hominivorax Diptera Calliphoridae myiasis screwworm proteases Diptera Calliphoridae miíases bicheira proteases

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Giglioti R., Guimarães S., Oliveira-Sequeira T.C.G., David E.B., Brito L.G., Huacca M.E.F., Chagas A.C.S. & Oliveira M.C.S. 2016. Proteolytic activity of excretory/secretory products of Cochliomyia hominivorax (Diptera: Calliphoridae). [Atividade proteolítica de produtos de excreção/secreção de Cochliomyia hominivorax (Diptera: Calliphoridae).] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):711-718. Embrapa Rondônia, Rodovia BR-364 Km 5,5, Porto Velho, RO 76815-800, Brazil. E-mail: luciana.gatto@embrapa.br Os perfis protéicos e a atividade proteolítica dos produtos de excreção/secreção (PE/S) das larvas de primeiro (L1), segundo (L2) e terceiro (L3) estágios de Cochliomyia hominivorax foram estudados em laboratório. Os perfis protéicos foram obtidos por eletroforese em géis de poliacrilamida (SDS-PAGE). Os PE/S de cada fase larval (L1, L2 e L3), tratados com inibidores de proteases, contendo 30µg, 40µg e 50µg de proteína, foram aplicados em géis de poliacrilamida a 10%. A atividade proteolítica dos PE/S na sua forma nativa, foi analisada em géis co-polimerizados com gelatina e por testes colorimétricos usando a azocaseína como substrato, com a caracterização das proteases feita por meio de inibidores sintéticos. Diferentes perfis protéicos foram observados para os instares larvais, com L1 apresentando o perfil mais complexo. Apesar disso, foram observadas várias bandas protéicas comuns a todos os estágios larvais. Os PE/S de todos os instares mostraram atividade proteolítica sobre a gelatina, evidenciada por zonas de proteólise, com predominância de massas moleculares aparentes mais altas em L1, enquanto que para L2 e L3 as zonas de proteólise puderam ser observadas também em regiões de menores massas. Os testes com inibidores de proteases usando a gelatina como substrato mostraram que os PE/S de L1, L2 e L3 eram compostos principalmente de serina-proteases. Adicionalmente, inibição foi observada nos PE/S de L2 tratada previamente com EDTA, um inibidor de metalo-proteases. Os ensaios com a zocaseína revelaram um aumento gradual da atividade proteolítica sobre este substrato com o progresso do desenvolvimento larval, com a mais forte inibição sendo observada após o tratamento com 3,4 dicloroisocumarina (DCI) para os PE/S de L1, L2 e L3. Estes resultados sugerem que as larvas de C. hominivorax produzem diferentes proteases, fato que pode estar relacionado a processos vitais para a sobrevivência do parasita, tais como a penetração nos tecidos dos hospedeiros e nutrição durante os estágios larvais.

Abstract in English:

RESUMO.- Brito L.G., Oliveira M.C.S., Rocha R.B., Silva Netto F.G., Marim A.D., Souza G.C.R. & Moura M.M.F. 2010. Anaplasma marginale infection in cattle from south-western Amazônia. [Infecção por Anaplasma marginale em bovinos na Amazônia Sul Ocidental, Brasil.] Pesquisa Veterinária Brasileira 30(3):249-254. Embrapa Rondônia, BR 364 Km 5,5, Porto Velho, RO 78900-970, Brazil. E-mail: luciana@cpafro.embrapa.br O presente estudo fornece os primeiros dados epidemiológicos relativos a infecção por Anaplasma marginale em bovinos criados na Amazônia Sul Ocidental brasileira. Foi adaptado um procedimento simples para a extração de DNA a partir de coágulos sanguíneos coletados em sete microrregiões do estado de Rondônia e duas mesoregiões do estado do Acre. A técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) foi aplicada para avaliar a freqüência da infecção por A. marginale em bovinos com idade entre 4 e 12 meses. Após a extração do DNA de cada amostra, a infecção nos bovinos foi investigada pela amplificação do gene “msp5” de A. marginale. As técnicas de amplificação do DNA revelaram que a freqüência de infecção por A. marginale foi de 98,6% (1.627/1.650) nas amostras provenientes de Rondônia e de 92,87% (208/225) nas amostras do Acre. A alta freqüência da infecção por A. marginale nos animais com idade entre 4 e 12 meses indica uma situação de estabilidade enzoótica nas regiões estudadas, as quais são comparáveis às detectadas por técnicas de imunodiagnóstico em outras regiões endêmicas no Brasil. A extração do DNA através do método aqui descrito pode ser utilizado em estudos epidemiológicos sobre a anaplasmose bovina e outros hemoparasitas.

• Anaplasma marginale

Abstract in Portuguese:

ABSTRACT.- Brito L.G., Oliveira M.C.S., Rocha R.B., Silva Netto F.G., Marim A.D., Souza G.C.R. & Moura M.M.F. 2010. Anaplasma marginale infection in cattle from south-western Amazônia. [Infecção por Anaplasma marginale em bovinos na Amazônia Sul Ocidental, Brasil.] Pesquisa Veterinária Brasileira 30(3):249-254. Embrapa Rondônia, BR 364 Km 5,5, Porto Velho, RO 78900-970, Brazil. E-mail: luciana@cpafro.embrapa.br The present study provides the first epidemiological data regarding infection by Anaplasma marginale in cattle reared in south-western Brazilian Amazonia. One simple procedure was adapted for the extraction of DNA from blood clots collected in seven microregions of Rondônia State and two mesoregions of Acre State. PCR method was used to asses the frequency of A. marginale infections in 4 to12-month-old cattle. The cattle infection was investigated by polymerase chain reaction (PCR) using the specific primer “msp5” for A. marginale. The DNA amplifications revealed that the mean frequency of A. marginale infection was 98.6% (1,627/1,650) in samples from Rondonia, and 92.87% (208/225) in samples from Acre. The high frequency of A. marginale infections in 4 to 12-month-old cattle indicate a situation of enzootic stability in the studied areas and are comparable to those detected by immunodiagnosis in different endemic regions in Brazil. The DNA extraction of clotted blood method described here can be used for epidemiological studies on anaplasmosis and other bovine hemoparasites.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Brito L.G., Regitano L.C.A., Huacca M.E.F., Carrilho E. & Moya Borja G.E. 2007. Genotype characterization of the horn fly Haematobia irritans from different Brazilian geographic regions based on randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis. Pesquisa Veterinária Brasileira 27(1):1-5. Laboratório de Sanidade Animal, Embrapa Rondônia, BR 364 Km 5,5, Porto Velho, RO 78900-970, Brazil. E-mail: luciana@cpafro.embrapa.br Blood-sucking diptera are important parasites in bovine production systems, especially regarding confinement conditions. Haematobia irritans, the horn fly, is one of the most troublesome species within bovine production systems, due to the intense stress imposed to the animals. An important aspect while studying the variability within a species is the study of the geographic structure of its populations and, attempting to find out the genetic flow of Brazilian populations of horn fly, the RAPD technique, which is suited for this purpose, has been used. The use of molecular markers generated from RAPD made it possible to identify the geographic origin of samples from different Brazilian geographic regions, as well as to estimate the genotypic flow among the different Brazilian populations of the horn fly.

• Haematobia irritans genetic diversity RAPD-PCR molecular markers

Abstract in Portuguese:

ABSTRACT.- Brito L.G., Regitano L.C.A., Huacca M.E.F., Carrilho E. & Moya Borja G.E. 2007. Genotype characterization of the horn fly Haematobia irritans from different Brazilian geographic regions based on randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis. Pesquisa Veterinária Brasileira 27(1):1-5. Laboratório de Sanidade Animal, Embrapa Rondônia, BR 364 Km 5,5, Porto Velho, RO 78900-970, Brazil. E-mail: luciana@cpafro.embrapa.br Blood-sucking diptera are important parasites in bovine production systems, especially regarding confinement conditions. Haematobia irritans, the horn fly, is one of the most troublesome species within bovine production systems, due to the intense stress imposed to the animals. An important aspect while studying the variability within a species is the study of the geographic structure of its populations and, attempting to find out the genetic flow of Brazilian populations of horn fly, the RAPD technique, which is suited for this purpose, has been used. The use of molecular markers generated from RAPD made it possible to identify the geographic origin of samples from different Brazilian geographic regions, as well as to estimate the genotypic flow among the different Brazilian populations of the horn fly.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Macedo D.M., Brito L.G. & Moya Borja G.E. 2001. [Emergence of Haematobia irritans in cattle dung pats in Seropédica county, Rio de janeiro] Emergência de Haematobia irritans em fezes bovinas no município de Seropédica, Rio de Janeiro. Pesquisa Veterinária Brasileira 21(2):77-80. Depto Parasitologia Animal, Univ. Fed. Rural do Rio de janeiro, Seropédica, RJ 23851-970, Brazil. This studywas carried out in order to investigate the emergence of adult flies of Haematobia irritans in cattle dung maintained in the field and in the laboratory, as well as other flies associated with dung pats. Two groups of cattle dung were used, one in the field and another in the laboratory, each group consisting of five fresh dung pats ofmedium size (about 30 cm in diameter), opaque appearance, presence of a thin externai crust· and firm consistency. The dung pats were covered with emergence cages in pyramidal format, presenting a hole in the superior part where a removable flask was coupled, and the substitution of the dung was done every 2 weeks. A total of 355 specimens of H. irritans was collected, 151 of which were obtained in the field and 204 specimens in the laboratory. These differences probably were dueto smaller temperature variations in the laboratory than in the field, besides the action of arthropodal predators, competitors and parasites of horn fly pupae that probably interfered in H. irritans emergence in cattle dung under field conditions. A higher number of females were observed in both conditions. Besides H. irritans, there were collected other flies associated with bovine manure belonging to the following families: Aulacigastridae, Muscidae, Psychodidae, Sarcophagidae, Sepsidae, Tachinidae and Ulidiidae. Sepsidae was the most abundant, with 5,224 specimens of the total of 8,928 flies collected, followed by Sarcophagidae with 2,235, Muscidae with 1,357, Aulacigastridae with 54, Psychodidae with 46, Ulidiidae with 6 and Tachinidae with 5 specimens.

• Haematobia irritans emergency bovine manure emergência fezes bovinas.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Macedo D.M., Brito L.G. & Moya Borja G.E. 2001. [Emergence of Haematobia irritans in cattle dung pats in Seropédica county, Rio de janeiro] Emergência de Haematobia irritans em fezes bovinas no município de Seropédica, Rio de Janeiro. Pesquisa Veterinária Brasileira 21(2):77-80. Depto Parasitologia Animal, Univ. Fed. Rural do Rio de janeiro, Seropédica, RJ 23851-970, Brazil. O presente trabalho teve como objetivo estudar a emergência de Haematobia irritans em fezes de bovinos mantidas a campo e em laboratório, além de observar a presença de outros dípteros associados às massas fecais. Foram utilizados dois grupos de fezes bovinas, um à campo e outro em laboratório, sendo cada grupo formado por cinco bolos fecais frescos de tamanho mediano (cerca de 30 cm de diâmetro), aparência opaca, cor esverdeada, presença de fina crosta externa e consistência firme. As fezes foram cobertas com gaiolas de emergência de formato piramidal, apresentando na parte superior um orifício onde foi acoplado um frasco removível; a substituição das fezes foi realizada quinzenalmente. Foram coletados um total de 355 espécimens de H. irritans, sendo 151 provenientes das gaiolas mantidas no campo e 204 em laboratório. Estas diferenças deveram-se provavelmente à menores oscilações de temperatura verificadas no laboratório do que àquelas ocorridas no campo, além da ação de artrópodes predadores, competidores e parasitóides que, provavelmente, interferiram na emergência de H. irritans nas fezes bovinas mantidas no campo. Foi observado maior número de fêmeas em comparação com machos em ambas as condições investigadas. Além de H. irritans, obteve-se outros dípteros associados às fezes bovinas, pertencentes as seguintes famílias: Aulacigastridae, Muscidae, Psychodidae, Sarcophagidae, Sepsidae, Tachinidae e Ulidiidae. Sepsidae foi a mais abundante, com 5.224 exemplares do total de 8.928 dípteros obtidos, seguida por Sarcophagidae com 2.235 espécimens coletados, Muscidae com 1.357, Aulacigastridae com 54, Psychodidae com 46, Ulidiidae com 6 e Tachinidae com 5 exemplares.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Brito L.G. & Moya Borja G.E. 2000. [Seasonal fluctuation of Dermatobia hominis in bovine skins from a slaughterhouse.] Flutuação sazonal de Dermatobia hominis em peles bovinas oriundas de matadouro. Pesquisa Veterinária Brasileira 20(4):151-154. Depto Parasitologia Animal, Univ. Fed. Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ 23851-970, Brazil The effect of temperature, rainfall and relative humidity on the seasonal fluctuation of Dermatobia hominis was investigated by counting the parasitized sidos of slaughtered cattle at the abattoir of Pirai county, in the state of Rio de Janeiro, Brazil, from November 1995 to October 1997. The higher incidence ofparasitized sidos was observed in November 1995 and December 1996. Secondary peaks were observed in March and May 1996 and March 1997. High percentage of parasitism in skins through the summer seasons was associated with mean temperatures of 25ºC and rainfall of 200 mm. The larval populations declined in both years from June to October, probably due to low temperatures at an average between 21 ºC and 22.SºC, and to Iow rainfall (under 50 mm). In a total of5,142 skins checked in the 2-year study, 2,710 sidos (52.7%) were parasitized with D. hominis larvae.

• Dermatobia hominis seazonal fluctuation bovine skin sazonalidade pele bovina.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Brito L.G. & Moya Borja G.E. 2000. [Seasonal fluctuation of Dermatobia hominis in bovine skins from a slaughterhouse.] Flutuação sazonal de Dermatobia hominis em peles bovinas oriundas de matadouro. Pesquisa Veterinária Brasileira 20(4):151-154. Depto Parasitologia Animal, Univ. Fed. Rural do Rio de Janeiro, Seropédica, RJ 23851-970, Brazil. Realizou-se o estudo do efeito da temperatura, precipitação pluviométrica e da umidade relativa sobre a flutuação sazonal de larvas de Dermatobia hominis em 5.142 peles de bovinos. As peles foram obtidas junto a um matadouro localizado no município de Piraí, estado do Rio de Janeiro, Brasil, durante o período de novembro de 1995 a outubro de 1997. Os maiores picos de peles parasitadas por berne foram observados em novembro de 1995 e dezembro de 1996. Picos menores de infestação foram observados nos meses de março e maio de 1996 e março de 1997, quando também foram observadas altas porcentagens de peles infestadas. O aumento na porcentagem de peles parasitadas acompanhou o aumento da temperatura média mensal, sendo que temperaturas iguais ou maiores que 25ºC se mostraram benéficas ao aumento na porcentagem de peles parasitadas, assim como a precipitação pluviométrica, onde observou-se que períodos de chuvas mensais acima de 200mm³ favoreceram ao aumento da porcentagem de peles parasitadas. As menores porcentagens de peles parasitadas por berne foram observadas durante o período de junho a outubro de 1996 e de 1997, quando verificou-se temperaturas médias mensais variando entre 21 ºC e 22,5°C, sendo que estas não se mostraram favoráveis ao aumento na porcentagem de peles parasitadas, assim como, precipitações pluviométricas mensais menores que 50 mm³ Das 5.142 peles examinadas, 2.710 (52,7%) encontravam-se parasitadas pelo berne.